PRACTICA 1 CONOCIMIENTO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO COMPUESTO

Medios de cultivo

AGAR MAC CONKEY

Medio empleado para aislar e identificar enterobacterias y coliformes a partir de heces feclaes, orinas, aguas negras y diversos alimentos.

•Preparacion:
Suspender 50g del medio deshidratado en un litro de agua purificada. Mezclar bien hasta que se obtenga una suspension uniforme. Dejar reposar de 10 a 15 minutos. Calentar suavemente agitando frecuentemente y hervir durante un minuto. Esterilizar en autoclave a 121ºC durante 15 munitos.

AGENTE DE DIAGNOSTICO

•Formula aproximada para 1000ml de agua purificada:
Peptona de Caseina 1.5g

Peptona de Gelatina 17.0g

Peptona de Carnes 1.5g

Lactosa 10.0g

Sales Biliares 1.5g

Cloruro de Sodio 5.0g

Agar 13.5g

Rojo Neutro 0.03g

Cristal Violeta 0.001g

pH final 7.1 +- 0.2
Ajustar o suplementar como se requiere para cumplir los criterios de funcionalidad.

ALTAMENTE HIGROSCOPICO


. AGAR SANGRE

Para aislar y cultivar microorganismos exigentes y detectar actividad hemolitica por adicion con sangre.


•Preparacion:
Suspender 40g del polvo en un litro de agua destilada. Mezclar perfectamente, calentar con agitacion frecuente y hervir durante un minuto hasta disolucion completa. Distribuir y esterilizar a 121ºC por 15 minutos. Para la preparacion de placas con sangre, enfriar la base a 45ºC y adicionar 5% de sangre esteril desfribinada.

•Formula para 1000ml de agua destilada:
Extracto de Levadura 5.0g

Infusion de Musculo Cardiaco (solido) 2.0g

Peptona de Caseina 13.0g

Cloruro de Sodio 5.0g

Agar 15.0g

pH final 7.3 +- 0.2

ALTAMENTE HIGROSCOPICO

.AGAR NUTRITIVO

Uso general en bacteriologia

•Preparacion:
Suspender 50g del polvo en un litro de agua destilada. mezclar bien y dejar en reposos 15 minutos. calentar a ebullicion de 1 a 2 minutos. distribuir y esterilizar a 121ºC durante 15 minutos.


•Formula para 1000ml de agua destilada:
Peptona de Gelatina 5.0g

Extracto de Carne de Res 3.0g

Agar 15.0g

pH final 6.8 +- 0.2

ALTAMENTE HIGROSCOPICO

. AGAR DE SAL Y MANITOL

Medio selectivo empleado para aislar estafilococos patogenos de materiales clinicos diversos (orina, genitales, heridas, exudados, gangleos, etc). Tambien se utiliza en la industria alimenticia en los mismos fines.

•Preparacion:
Supender 111g. del polvo en un litro de agua purificada. Mezclar bien y calentar agitando frecuentemente. Hervir durante un minuto hasta disolucion completa. Esterilizar a 121ºC durante 15 minutos.

•Formula aproximada para 1000ml de agua purificada:
Extracto de Carne 1.0g

Peptona de Carne 5.0g

Peptona de Caseina 5.0g

Cloruro de Sodio 75.0g

D - Manitol 10.0g

Agar 15.0g

Rojo Fenol 0.025g

pH final 7.4 +- 0.2


AGAR VERDE BRILLANTE

Selectivo para el aislamiento de Salmonella.

•Preparacion:
Suspender 58g del polvo en un litro de agua destilada. Mezclar perfectamente y calentar agitando frecuentemente. Hervir por un minuto. Distribuir y esterilizar en autoclve a 121ºC durante 15 minutos.

•Formula para 1000ml de agua destilada:
Pesptona de Carne 5.0000g

Extracto de Levadura 3.0000g

Peptonas de Caseina 5.0000g

Cloruro de Sodio 5.0000g

Lactosa 10.0000g

Sacarosa 10.0000g

Rojo Fenol 0.0800g

Verde Brillante 0.0125g

Agar 20.0000g

pH final 6.9 +- 0.2

ALTAMENTE HIGROSCOPICO

Tincion de gram

MATERIAL BIOLOGICO
• Muestra biológica
EQUIPO: Mechero, Microscopio óptico, Platina caliente, Portaobjetos, Guantes, Cubrebocas, Hisopos, Frascos goteros.
SUSTANCIAS: Colorante cristal violeta, Colorante de safranina, Aceite de inmersión, Lugol, Alcohol etílico absoluto, Colorante carbolfucsina, Colorante azul de metileno, Solución de alcohol-acetona, Solución de alcohol ácido.
TÉCNICA:
1. Hacer un extendido delgado del material para estudio, y permitir que se seque al aire.
2. Fijar el material al portaobjetos, pasándolo tres o cuatro veces a través de la llama de un mechero de bunsen, de modo que el material no se lave durante el procedimiento de tinción. Se recomienda el uso de alcohol para fijar el material a ser teñido con Gram (cubrir el extendido con metanol o etanol por unos pocos minutos).
3. Colocar el extendido en una bandeja para teñido, y cubrir la superficie con una solución de cristal-violeta.
4. Después de un minuto (con algunas soluciones puede emplearse menos tiempo) de exposición al colorante de cristal violeta, lavar minuciosamente con agua destilada o buffer.
5. Cubrir el extendido con la solución de yodo para Gram durante 1 minuto. Lavar nuevamente con agua.
6. Sostener el extendido entre el pulgar y el índice, y cubrir la superficie con unas pocas gotas del decolorante alcohol-acetona, hasta que no se arrastre mas violeta. Esto lleva usualmente 10 segundos o menos.
7. Lavar con agua corriente y volver a ubicar el extendido sobre la bandeja de tinción. Colocar sobre la superficie safranina de contraste durante un minuto. Lavar con agua corriente.
8. Ubicar el extendido en posición vertical en una bandeja de tinción, permitiendo que se escurra el exceso de agua y el extendido se seque.
9. Examinar el extendido bajo un objetivo de inmersión x 100(aceite).
Las bacterias grampositivas se tiñen de azul obscuro; las gramnegativas aparecen rosa pálidas. COLORACIÓN ALCOHOL-ACIDO-RESITENTES

REPORTE DE LA PRÁCTICA.

Tipo de muestra:_Eses fecales y saliva_____________________________________

Característica de la muestra:se mustran en racimos __en cadena________ y extendidos____________________

tamaño es de 4x,10x,40x y 100x

estas son las que observamos
se observa que las celulas son de diferentes morfologias y su tamaño es diferente a las demas

Calor Húmedo:
El calor húmedo produce desnaturalización y coagulación de proteínas. Estos efectos se deben principalmente a dos razones:
*El agua es una especie química muy reactiva y muchas estructuras biológicas son producidas por reacciones que eliminan agua.
*El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho más elevado que el aire.

Antecedentes: El primer antecedente fue la marmita de Papin en 1681, semejante a una olla a presión que permitía mantener el agua por encima de los 100° C.

En 1830 William Henry, médico de Manchester; trataba ropa y otros utensilios provenientes de personas infectadas exponiéndolos en una vasija a vapor recalentado y aire caliente obteniendo el material libre de infección.

Pasteur en 1876, Koch y Wolffhugel en 1881 dan los fundamentos de la esterilización por calor seco y calor húmedo: 30 minutos a 110° - 120° C de exposición al vapor eran equivalentes a una hora de calor seco a 130° - 150° C.

En 1884 aparece en París con el nombre de Chamberland un equipo para usar en laboratorio, el que luego se masificaría en todos los laboratorios biológicos.

AUTOCLAVE
Se realiza la esterilización por el vapor de agua a presión. El modelo más usado es el de Chamberland.

Esteriliza a 120º a una atmósfera de presión (estas condiciones pueden variar) y se deja el material durante 20 a 30 minutos.
Equipo:
Consta de una caldera de cobre, sostenida por una camisa externa metálica, que en la parte inferior recibe calor por combustión de gas o por una resistencia eléctrica.

La caldera se cierra en la parte superior por una tapa de bronce sujetada por bulones, mariposas o charnelas. Esta tapa posee tres orificios, uno para el manómetro, otro para el escape de vapor en forma de robinete (también llamado espita) y el tercero, para una válvula de seguridad que funciona por contrapeso o a resorte.

Funcionamiento y método para esterilizar adecuadamente en Autoclave:
Se coloca agua en la caldera, procurando que su nivel no alcance a los objetos que se disponen sobre una rejilla o canasta de metal. Se cierra asegurando la tapa, ajustando los bulones y se da calor, dejando abierta la válvula de escape hasta que todo el aire se desaloje y comience la salida de vapor en forma de chorro continuo y abundante.

Se cierra la espita de vapor y se espera hasta que llegue a la temperatura adecuada. A partir de allí se cuenta el tiempo de esterilización, luego del cual se debe esperar al descenso de la temperatura para abrir la espita de purga y la tapa del autoclave nuevamente.

Atmósferas	Grados Centígrados
0	100
1/2	112
1	120
1 1/2	128
2	135

Este proceso de esterilización es el que mejor resultados dá en microbiología. El vapor de agua a fuerte presión actúa a mayores temperaturas:

Tiempos de esterilización en autoclave:

Del tiempo, temperatura y presión usados en la esterilización depende el éxito alcanzado. Generalmente los datos presión y temperatura son fijados, y el único factor que se varía es el tiempo. Los materiales necesitan diferentes tiempos de esterilización dependiendo de su textura, porosidad, y otras características propias de cada material. Algunos materiales como el hule, necesitan poco tiempo, mientras otros como el metal quirúrgico necesitan más. Los siguientes datos han sido tomados para una temperatura de esterilización de 250ºF (121ºC) a 15-20 PSI.

- Guantes de Caucho (Hule) 15 minutos
- Sondas (base tejida) 15 minutos
- Sondas (látex) 15 minutos
- Frascos de Vidrio, Cristalería en General 20 minutos
- Agua en frascos 20 minutos
- Jeringas de Vidrio 20 minutos
- Bandeja 30 minutos
- Equipo de transfusión 30 minutos
- Paquetes de maternidad 30 minutos
- Ropa 30 minutos
- Torundas 30 minutos
- Paquete quirúrgico 45 minutos
- Instrumental de acero inoxidable 45 minutos

*Cuando se esteriliza se deben hacer paquetes bien cerrados y bien ordenados, para que haya buena penetración de vapor en el material.

No incluir dentro del mismo paquete material con diferentes tiempos de esterilización. Ej. : Lencería y Vidrio.

El método utilizado para envolver los paquetes deberá garantizar el mantenimiento de las condiciones de esterilidad de los materiales durante su almacenamiento.

Como Cargar el Autoclave

a) Se deben acomodar los bultos o paquetes de tal forma que haya una libre circulación de vapor entre ellos (no tratar de llenar el autoclave hasta sobrecargarlo).
b) Colocar de lado las botellas, frascos y cualquier clase de recipiente no poroso de material seco. Esto permite un pronto desplazamiento del aire y un rápido contacto del vapor con las superficies de las vasijas y su contenido. También facilita el secado.
c) Esterilizar los líquidos separándolos de otros materiales.
d) Cuando se esterilizan líquidos, debe hacerse con los recipientes destapados.
e) La cristalería deberá esterilizarse colocando los recipientes boca abajo u horizontales (nunca con la boca hacia arriba).

Conocimiento del material de microobiologia

1. Conocimiento del material de microobiologia

procedimiento

1) Recorrido por el laboratorio

2)visualizar material representaticion

pipeta draduada porta y cubre objetos microscopio

mateaz elnmeyer jeringas

cajas de petril vidrio de reloj

asas de plitino horno de secado

tubos de capilares encubadora

mecheros ficher autoclave

refrigerador

1)¿uales son las reponsabilidades de cada una de las partes involucradas (maestros,alumnos,ect.)

para logras un acuerdo de trabajo plastico en micrroobiologia?

R= Responsabilisarse enseñando a los alumnos y alumnos y ayudarlos en los estudios

2)como podrias colavorar con tu comunidad con practicas de los microorganismos
R=ESTUDIANDO LA ZONA

3) ¿Describe de seguridad que consideren mas importantes para el buen funcionamiento de las practicas?
R= Utilizar labata,no tirar los resipientes realizar las practicas

4)QUE indicadores debes de sueguir al preparar en caja de petril?
R=Medios de cultivo y cajas de petril

5)¿Que debes de aser en caso de una muestra de micrrorganismos parogenos?
R= Analizarla y mantenerla aislada

6)¿Consideras que las instalaciones son adecuadas?
R=Si son adecuadas

7)¿Tienes una sugerencia para mejora?
R= Si conprar equipo nuevo para el laboratorio